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CAR-T细胞疗法需要先从患者体内获得T淋巴细胞，然后通过体外转基因技术 transduce CAR靶向结构域。这一过程需要在细胞培养体系中得到充分的扩增，以获得足够的治疗CAR-T细胞数量。因此，CAR-T细胞的体外扩增能力直接决定了能否获得满足治疗需要的细胞数量。我们可以通过多次传代培养获得的累积细胞数、细胞扩增的倍数增加(Fold increase)以及达到设定细胞数需要的培养时间来评估CAR-T细胞产品的体外扩增能力【1】。这些指标反映了CAR-T细胞的增殖和活力,是CAR-T细胞工艺开发的关键性能指标之一。
Fig1：CAR-T细胞体外扩增过程
CAR-T细胞输注入体内后的存活时间和持久性也是功能的重要衡量指标。持久存活的CAR-T细胞可以发挥更持久的肿瘤杀伤作用。我们通常通过流式细胞术定期检测外周血CAR-T细胞的数量变化来评估其在体内的持久性。一般输注后1-6个月甚至更长时间都可持续检出，检出峰值一般出现在输注后1-2周，峰值后的CAR-T细胞数量随时间递减是正常的【2】。理想的CAR-T细胞制剂应具有至少3-6个月的体内存活时间，这样才可以保证达到满意的治疗效果。
Fig2：CAR-T细胞体内持久性相关检测
Fig3：CAR-T细胞阻抗检测
CAR-T细胞识别肿瘤并激活后，会释放各种细胞因子和细胞毒颗粒来攻击和杀伤肿瘤细胞。所以我们可以检测CAR-T细胞释放的IFN-γ、肿瘤坏死因子-α、穿孔素、颗粒酶等水平，来评价其毒杀肿瘤的细胞毒活性以及活化状态【4】。体外我们可以通过共培养CAR-T细胞和靶肿瘤细胞,检测上述细胞因子和毒素的含量。脱颗粒实验也可以直观反映CAR-T细胞释放穿孔素和颗粒酶的水平，这些都是评价CAR-T细胞产品杀伤活性的重要指标。
Fig4：CAR-T细胞击杀靶细胞能力检测
Fig5：CAR-T细胞长久持久性检测
Fig6：CAR-T细胞治疗B-NHL的CRS分级
CAR-T疗法作为时下最热门的明星疗法，紧随国内第三款CAR-T产品获批上市，相关CAR-T企业和平台纷纷加速研发步伐，积极着眼于差异化布局。未来相关企业除竞逐产品安全性能，降本增效将势在必行，国产替代也将成为产业发展的主要途径。免疫磁珠作为CAR-T细胞制备的重要物料，在T细胞分选/激活环节扮演着相当重要的角色。竞技宝官网生物GMP级产品ActSep?CD3/CD28分选激活磁珠（货号：GMP-TL603）集分选和激活功能于一体，高效实现T细胞的分选、激活和扩增，适合于人T细胞、CAR-T等多种T细胞培养技术的应用，并且该产品已完成美国FDA的DMF II型备案（备案号：038124），支持细胞药物注册申报。
不同的磁珠添加比例下，T细胞激活培养14天后检测LAG3和PD1的表达水平， ActSep?与竞品基本持平，3：1的磁珠与细胞比例下，ActSep?耗竭指标表达更低。此外，在Day 5去除磁珠，将进一步降低T细胞的耗竭水平。
参考文献：
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【6】 《CD19 CAR-T治疗B-NHL毒副作用临床管理中国专家共识（2022）》
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